图示 JY99-IIDN超声波细胞粉碎机

　　1、材料与设备

　　黄精：购于沈阳中街新药特药;循环水多用真空泵;HH一6数显恒温水浴锅;光栅分光光度计：山东高密彩虹分析仪器有限公司;电热鼓风恒温干燥箱;JY99-IIDN超声波细胞粉碎机：宁波新芝生物科技股份有限公司。

　　2、实验方法

　　①多糖粗提品的制备

　　用天平称取研磨后的黄精碎片100g，80%的乙醇溶液80℃回流提取6h。提取后的黄精碎片于水浴锅上烘干。

　　②超声细胞粉碎仪提取黄精多糖

　　准确称取经乙醇抽提后的黄精碎片30g，放于三角瓶中，加入8倍量的蒸馏水放入超声细胞破碎仪中，调整工作时间最大为99s，间隔时间1s，工作次数36次。然后开始用超声波细胞粉碎机进行超声处理，并逐渐调节工作电压至最大。超声处理1 h取出，过滤。向滤液中再加入6倍量的蒸馏水，按同样的工作参数进行第二次超声处理，40min后取出，合并两次滤液。抽滤，除去杂质后将滤液取出按l：l浓缩至30 mL。然后加入3倍量的乙醇进行沉淀，静置大约1h至上清液与沉淀出现明显分层后抽滤，在抽滤过程中不断加入无水乙醇，待所得样品沉淀彻底干燥后取出。

　　3、精多糖含量的测定

　　采用苯酚一硫酸法测定黄精多糖的含量具体步骤如下：

　　准确称取葡萄糖4 mg，置于100 mL容量瓶中。然后分别精确吸取0.4、0.6、0.8 1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL。加于标号的试管中，各以蒸馏水补至2.0 mL，然后加入6%苯酚1.0mL及浓硫酸5.0mL。静置10min摇匀，室温放置20min以后于490mm测光密度，以2.0mL水按同样显色操作为空白，横坐标为黄精多糖微克数，纵坐标为光密度值绘制标准曲线。

　　4、结论分析

　　用于各种动植物细胞、病毒细胞、细菌、牙孢及组织超声波破碎提取法利用超声波其强大的空化效果和许多次级效应如：机械震动，击碎乳化，扩散等可以击碎细胞壁释放物质，常用于各种动植物细胞、病毒细胞、细菌、芽孢及组织的破碎。本研究采用超声波细胞粉碎机提取黄精多糖，获得的多糖同水煎法、稀碱浸提法相比颜色浅，杂质少，纯度高，是提取黄精多糖的一种有效方法。