1、点击“准备酶切目的DNA” ----桌面右侧出现DNA， 10×Buffer，限制性内切酶， ddH₂0，左侧:实验仪器：振荡器，恒温槽，EP管。

   实验提示：准备EP管

 

2、准备EP管 ----点击EP管，并拖动至工作台中央（EP管外显示刻度0.5ml，1.0ml，鼠标置于EP管上，说明框内显示“1.5mlEP管”，3秒钟后隐去）；

      实验提示：准备加入目的DNA

 

3、加入RT-PCR产物（目的DNA）---- 1 点击微量吸液器（说明框显示“吸取15ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“20ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至盛有RT-PCR产物处，点击RT-PCR产物（枪头内显示吸取15ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器回到原位置。

实验提示：下一步选择两种限制性内切酶。

 

    4、选择限制性内切酶---- 1点击限制性内切酶，出现对话框，出现RT-PCR产物序列：AACGAATTCACAATGGTCAGATCATCTTCT…

及备选择的5种内切酶及各自切割位：SCA I:AGTACT ,

BamH I:GGATCC,

PVU Ⅰ:CGATCG,

ECOR I:GAATTC,

PVU Ⅱ:CAGCTG,

XMN I: GAANNN TTC。

各个酶前面有一个选择框，点击即为选择用。选择“BamH I”和“ECOR I”提示“选择正确”，对话框消失，如选择其他组合提示“选择错误，请重新选择”。

    实验提示：加入选中的限制性内切酶

 

5、加入限制性内切酶----  1 点击微量吸液器（说明框显示“吸取0.25ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“1ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至盛有BamH I处，点击（枪头内显示吸取0.25ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，微量吸液器回到原位置。⑤点击微量吸液器，拖动至盛有ECOR I处，点击（枪头内显示吸取0.25ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后EP管盖子盖上，微量吸液器回到原位置。

     实验提示: 加入10×Buffer

 

6、加入10×Buffer ----点击微量吸液器（说明框显示“吸取2ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“5ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至10×Buffer处，点击10×Buffer（枪头内显示吸取2ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，EP管盖子打开，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器枪头自动至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

实验提示：加入ddH₂O

 

7、加入ddH₂O ----①点击微量吸液器（说明框显示“吸取2.5ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“5ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至ddH₂O处，点击ddH₂O（枪头内显示吸取2ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，EP管盖子打开，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器枪头自动至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

实验提示：振荡混匀

 

8、振荡---- 1点击振荡器，振荡器出现在工作台中央。②移动加完样的EP管至振荡器上方，③点击“开始振荡”，EP管开始在振荡器上方旋转振荡，④点击“停止”，即停止振荡，振荡器消失，EP管出现在工作台中央。

     实验提示：限制酶酶切

 

    9、酶切---- 1点击恒温槽，恒温槽出现在工作台中央；3移动振荡后的EP管至恒温槽内，③出现选择恒温槽温度对话框，“1：16℃”，“2：37℃”，“3：42℃”，选择“37℃”则提示“选择正确”，对话框消失，如选择其他则提示“选择错误，请重新选择”④点击“开始酶切”，则出现酶切画面，并出现定时器，时间快速转动，至提示4小时后酶切结束。画面显示有粘性末端的DNA形成，3秒钟后隐去。

      实验提示：准备酶切载体DNA

 

1、点击“准备酶切载体DNA（质粒DNA）” ----桌面右侧出现载体DNA， 10×Buffer，限制性内切酶，碱性磷酸酶，ddH₂0，左侧:实验仪器：振荡器，恒温槽，EP管。

   实验提示：准备EP管

 

2、准备EP管 ----点击EP管，并拖动至工作台中央（EP管外显示刻度0.5ml，1.0ml，鼠标置于EP管上，说明框内显示“1.5mlEP管”，3秒钟后隐去）；

      实验提示：准备加入质粒DNA

 

3、加入质粒DNA---- 1 点击微量吸液器（说明框显示“吸取15ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“20ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至盛有载体DNA处，点击载体DNA（枪头内显示吸取15ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器回到原位置。

实验提示：下一步选择两种限制性内切酶

 

     4、选择限制性内切酶---- 1点击限制性内切酶，出现对话框，出现RT-PCR产物序列：AACGAATTCACAATGGTCAGATCATCTTCT…

及备选择的5种内切酶及各自切割位：SCA I:AGTACT ,

BamH I:GGATCC,

PVU Ⅰ:CGATCG,

ECOR I:GAATTC,

PVU Ⅱ:CAGCTG,

XMN I: GAANNN TTC。

各个酶前面有一个选择框，点击即为选择用。选择“BamH I”和“ECOR I”提示“选择正确”，对话框消失，如选择其他组合提示“选择错误，请重新选择”。

     实验提示：加入选中的限制性内切酶

 

5、加入限制性内切酶----  1 点击微量吸液器（说明框显示“吸取0.25ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“1ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至盛有BamH I处，点击（枪头内显示吸取0.25ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，微量吸液器回到原位置。⑤点击微量吸液器，拖动至盛有ECOR I处，点击（枪头内显示吸取0.25ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后EP管盖子盖上，微量吸液器回到原位置。

     实验提示: 加入10×Buffer

 

6、加入10×Buffer ----点击微量吸液器（说明框显示“吸取2ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“5ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至10×Buffer处，点击10×Buffer（枪头内显示吸取2ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，EP管盖子打开，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器枪头自动至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

实验提示：加入ddH₂O

 

7、加入ddH₂O ----点击微量吸液器（说明框显示“吸取2.5ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“5ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至ddH₂O处，点击ddH₂O（枪头内显示吸取2ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，EP管盖子打开，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器枪头自动至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

实验提示：振荡

 

8、振荡---- 1点击振荡器，振荡器出现在工作台中央。②移动加完样的EP管至振荡器上方，③点击“开始振荡”，EP管开始在振荡器上方旋转振荡，④点击“停止”，即停止振荡，振荡器消失，EP管出现在工作台中央。

     实验提示：酶切质粒DNA

 

     9、酶切---- 1点击恒温槽，恒温槽出现在工作台中央；3移动振荡后的EP管至恒温槽内，③出现选择恒温槽温度对话框，“1：16℃”，“2：37℃”，“3：42℃”，选择“37℃”则提示“选择正确”，对话框消失，如选择其他则提示“选择错误，请重新选择”④点击“开始酶切”，则出现酶切画面，并出现定时器，时间快速转动，至提示4小时后酶切结束。

      实验提示：加入碱性磷酸酶

 

10、加入碱性磷酸酶----点击微量吸液器（说明框显示“吸取2.5ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“5ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至碱性磷酸酶处，点击碱性磷酸酶（枪头内显示吸取2ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，EP管盖子打开，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器枪头自动至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

      实验提示：振荡混匀

 

11、振荡---- 1点击振荡器，振荡器出现在工作台中央。②移动加完样的EP管至振荡器上方，③点击“开始振荡”，EP管开始在振荡器上方旋转振荡，④点击“停止”，即停止振荡，振荡器消失，EP管出现在工作台中央。

     实验提示：碱性磷酸酶切除质粒DNA5’-末端的磷酸基团

 

     12、酶切---- 1点击恒温槽，恒温槽出现在工作台中央；3移动振荡后的EP管至恒温槽内，③出现选择恒温槽温度对话框，“1：16℃”，“2：37℃”，“3：42℃”，选择“37℃”则提示“选择正确”，对话框消失，如选择其他则提示“选择错误，请重新选择”④点击“开始酶切”，则出现酶切画面，并出现定时器，时间快速转动，至提示4小时后酶切结束。画面显示有粘性末端的载体DNA形成“半环状”，3秒钟后隐去。

         实验提示：连接反应

 

1、点击“开始连接反应” ----桌面右侧出现有粘性末端的DNA，有粘性末端的载体DNA，10×DNA连接Buffer，DNA连接酶，ddH₂0，左侧:实验仪器：振荡器，恒温槽，EP管。

实验提示：准备EP管

 

2、准备EP管----点击EP管，并拖动至工作台中央（EP管外显示刻度0.5ml，1.0ml，鼠标置于EP管上，说明框内显示“1.5mlEP管”，3秒钟后隐去）；

    实验提示：加入酶切后目的DNA

 

3、加入酶切后的目的DNA---- 1 点击微量吸液器（说明框显示“吸取10ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“20ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至盛有酶切后的目的DNA处，点击酶切后的目的DNA（枪头内显示吸取10ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器回到原位置。

实验提示：加入酶切后的质粒DNA

 

4、加入酶切后的质粒DNA---- 1 点击微量吸液器（说明框显示“吸取5ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“10ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至盛有有粘性末端的载体DNA处，点击酶切后的质粒 DNA（枪头内显示吸取5ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器回到原位置。

实验提示：加入10×DNA连接Buffer

 

5、加入10×DNA连接Buffer ---- 1 点击微量吸液器（说明框显示“吸取2ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“10ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至盛有10×DNA连接Buffer处，点击10×DNA连接Buffer（枪头内显示吸取2ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器回到原位置。

实验提示：加入DNA连接酶

 

6、加入DNA连接酶---- 1 点击微量吸液器（说明框显示“吸取0.25ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“1ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至盛有DNA连接酶处，点击DNA连接酶（枪头内显示吸取0.25ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器回到原位置。

     实验提示：加入ddH₂O

 

 7、加入ddH₂O ----点击微量吸液器（说明框显示“吸取2.75ul液体”，3秒钟后隐去）；2 点击装有消毒枪头的塑料盒（说明框显示“5ul枪头”，3秒钟后隐去），加入到微量吸液器上；3点击微量吸液器，拖动至ddH₂O处，点击ddH₂O（枪头内显示吸取2.75ul红色液体）；4拖动微量吸液器至EP管处，EP管盖子打开，点击微量吸液器（出现枪头内液体注入EP管内的画面），液体注入后，EP管盖子盖上，微量吸液器枪头自动至垃圾桶，微量吸液器回到原位置。

实验提示：振荡器振荡

 

8、振荡---- 1点击振荡器，振荡器出现在工作台中央。②移动加完样的EP管至振荡器上方，③点击“开始振荡”，EP管开始在振荡器上方旋转振荡，④点击“停止”，即停止振荡，振荡器消失，EP管出现在工作台中央。

    实验提示：恒温槽连接

 

    9、恒温槽连接---- 1点击恒温槽，恒温槽出现在工作台中央；②移动振荡后的EP管至恒温槽内，③出现选择恒温槽温度对话框，“1：4℃”，“2：16℃”，“3：42℃”，选择“16℃”则提示“选择正确”，对话框消失，如选择其他则提示“选择错误，请重新选择”④点击“开始连接”，则出现连接画面，图中显示酶切后的目的DNA和酶切后的质粒DNA逐渐靠近连接，连接在一起后提示：“DNA重组成功”。