实验目的

为了解大鼠肺组织中炎症因子蛋白表达情况，需要将组织内的蛋白尽量释放并收集，使用研磨和超声手段，对肺组织进行匀浆和细胞破碎，最终分离得到溶液中的蛋白进行WB实验，从而了解蛋白表达情况。

实验步骤

取0.2g大鼠右肺组织样本，切碎，取适量溶解并混匀后的RIPA裂解液，使用前加入酶抑制剂，在每100 mg右肺组织样本内加入 1 mL 的RIPA裂解液，后使用SCIENTZ-24高通量组织研磨器将组织充分研磨匀浆，于4℃的条件下裂解30～60 min，将裂解后的组织置于SCIENTZ-1500F超声分散仪上破碎，用高速离心机10000r/min离心10min，取上清液。提取总蛋白并利用BCA试剂盒测定总蛋白浓度，于100℃水中煮5min，使蛋白变性后，置于冰上使其骤冷，提取为实验使用的蛋白样本，置于－20℃冰箱中冷冻保存。使用蒸馏水清洗干净灌胶玻璃板，竖直放置使其自然晾干。分别使用分离胶、5%浓缩胶处理后，将凝胶置于电泳槽进行电泳，电泳结束后将蛋白转移到预先准备的 NC 膜上，制备转膜“三明治”，在电转仪中转膜结束后，摇床洗膜，封闭液封闭1～2 h倒掉封闭液，加入稀释的相应抗体。在摇床上4℃过夜，TBS－T洗膜3次，每次10 min，加入二抗。二抗孵育结束后，于摇床上用TBST洗膜5～10min×3次。加ECL工作液于印迹膜上30～60s，吸干发光液，置印迹膜于成像分析仪自动成像，软件ImageJ分析蛋白条带灰度值。

实验结果

各组大鼠肺组织中IL－17、IL－22、IL－10、IL－35蛋白表达情况比较与空白组比较，模型组和假 贴组肺组织中 IL－17、IL－22蛋白相对表达量均明显升高(P均＜0.05)，IL－10、IL－35蛋白相对表 达量均明显降低(P均＜0.05) ; 与模型组和假贴组比较，地塞米松组、发酵组、非发酵组肺组织中IL－17、IL－22蛋白相对表达量均明显降低(P均＜0. 05)，IL－10、IL－35蛋白相对表达量均明显升高( P均＜0.05) ; 地塞米松组、发酵组、非发酵组间各指标比较差异均无统计学意义( P均＞0.05)。

表1 空白组和支气管哮喘各组大鼠肺组织中IL－17、IL－22、IL－10、IL－35蛋白相对表达量比较(x±s)

图一空白组和支气管哮喘各组大鼠肺组织中IL－17、IL－22、IL－10、IL－35蛋白表达电泳图