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OD600的应用

OD600是指在600nm波长处的吸光度，常常被用于表示细菌液体培养液中的细菌浓度。在细菌连续培养过程中，在不同的时间点检测菌液的OD600值，然后以时间为横坐标，OD600为纵坐标，描绘细菌的生长曲线。结合生长曲线，可以评估细菌所处的生长阶段，进而可以确定合适的诱导表达或收获的时间点。

图1 大肠杆菌生长曲线

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OD600的检测原理

菌液是一种非均相的悬浊液，当入射光照射在菌液上时，光线被细菌（菌体）所散射，所以仪器检测到的“吸光度”实际上是由散射和吸收综合作用产生的，而不是如均相溶液中一般是由于溶质分子光吸收引起的。

当使用不同型号的设备来检测同一样本的吸光度时，可能会得到不同的OD600，这与仪器的光路设计有关。仪器的检测器与样本之间的距离（d）和检测器的大小（R）都会对吸光度产生影响。如图2所示，当检测器位于d1时，散射光可以被检测器接收到，此时吸光度较小，而当检测器位于d2时，光不能被检测器接收到，此时吸光度较大。

图2 菌液光散射的示意图（Stevenson et.al,2016）

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使用不同的设备检测OD600

不同设备检测到的OD600不能直接比较。如图3所示，使用5个型号的设备（Biomat3，ND 2000 A，ND 2000 B，Genesys，Beckman DU530）分别对不同稀释倍数（X1，X2，X5，X10）的样本进行OD600检测。结果显示不同的设备对同一样本的OD600检测值不一样。如果需要比较不同设备间的OD600值，需要先确定相同样品在不同设备上检测得到的吸光度值之间的恒定偏差或者比率，然后进行校准。

图3 不同型号的仪器OD600检测结果（Stevenson et.al,2016）

因此当进行细菌菌株筛选、培养基优化、添加剂评估等需要比较微生物生长曲线的研究工作时，最好选择同一型号的设备进行实验，保证实验条件的一致性。

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